免疫共沉淀（Co-IP）

1.免疫共沉淀（Co-IP）简介

免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation，Co-IP）技术利用抗体抗体特异性的识别并结合样品中的抗原，从样品中捕获靶蛋白，再利用琼脂糖交联的protein A/G特异性结合抗体，从而使抗原抗体复合物沉淀下来^[1]。经过洗脱，凝胶电泳分离，结合Western Blot 等技术定量或定性的分析样品中特定抗原的含量情况。由于过程中采用了非变性条件，保留了蛋白质与多肽、蛋白与蛋白在完整细胞内的生理性相互作用，能够验证两种蛋白质在细胞内的天然结合，符合体内实际情况，检测结果可信度高，常被用于研究蛋白质与多肽、蛋白与蛋白相互作用。    

 

2.免疫共沉淀（Co-IP）原理

细胞裂解后，蛋白质之间的相互作用被保留下来。蛋白质X的抗体结合于琼脂糖磁珠上的Protein A/G，当抗体免疫沉淀抗原蛋白X时，能与抗原蛋白X结合的目的蛋白Y一并被沉淀下来，形成“目标蛋白+抗原蛋白+抗体+Protein A/G”免疫复合物，用Western Blot或质谱检测目的蛋白^[2]。

 

 

图1：免疫共沉淀（Co-IP）示意图

 

3.免疫共沉淀（Co-IP）的优势

（1）蛋白质以翻译后被修饰的天然状态存在^[3]。

（2）可以用Western Blot检测两个已知蛋白之间的相互作用，也可以用质谱鉴定与已知蛋白相互作用的未知蛋白^[4]。

（3）可以选择多种样品进行实验，验证两种蛋白质在细胞内的天然结合，符合体内实际情况，检测结果可信度高。

（4）免疫共沉淀可以在自然状态下检测蛋白之间的相互作用^[5]，该方法能够尽量避免人为的影响。

 

4.免疫共沉淀（Co-IP）的注意事项

（1）需要特异性IP级别诱饵蛋白抗体（重点）；

（2）如果没有特异性抗体，则需要考虑构建重组标签质粒，用标签抗体进行Co-IP实验；

（3）样品种类实验风险：过表达细胞样品<细胞样品<动物组织样品<植物样品（通常为转基因植物，标签抗体也很难达到特异性富集）；

（1）CoIP-MS风险：由于存在特异性抗体高丰度蛋白，质谱不一定能够鉴定到诱饵蛋白。

（2）使用单克隆抗体可以避免污染的发生，保证是抗体的作用使蛋白沉淀下来。

（3）抗体要具有特异性，要确保能和样本中的抗原结合。

 

 

参考文献

[1] Whiterhiannon R , Ponsfordamy H , Weekesmichael P ,et al.Co-immuno-precipitation (co-IP) and yeast-2-hybrid (Y2H) analyses of TsUBE2L3.[J].PLOS Pathogens, 2016.DOI:10.1371/journal.ppat.1005977.g004.

[2] Tiwari K K .Study of nitric oxide synthase-interacting proteins by mammalian Co-IP and yeast two hybrid assay[J].Dissertations & Theses - Gradworks, 2012.

[3] Steinbrenner J , Eldridge M ,Daniel F. A. Tomé,et al.A Simple and Fast Protocol for the Protein Complex Immunoprecipitation (Co-IP) of Effector: Host Protein Complexes[J].Methods in Molecular Biology, 2014, 1127:195.DOI:10.1007/978-1-62703-986-4_16.

[4] Hui,Hu,Tao,et al.Screening and identification of proteins interacting with IL-24 by the yeast two-hybrid screen, Co-IP, and FRET assays.[J].Anti-cancer drugs, 2016.DOI:10.1097/CAD.0000000000000343.

[5] Steinbrenner J , Eldridge M ,Daniel F. A. Tomé,et al.A Simple and Fast Protocol for the Protein Complex Immunoprecipitation (Co-IP) of Effector: Host Protein Complexes[J].Methods in Molecular Biology, 2014, 1127:195.DOI:10.1007/978-1-62703-986-4_16.