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1.培养基pH值过碱：使用无菌CH3COOH溶液调整pH值，或充入无菌CO₂。
2.细胞老化：启用新的保种细胞。
3.支原体污染：分离培养物，检测支原体，清洁消毒支架以及培养箱。
4.胰蛋白酶消化过度：减少胰酶消化时间或降低胰酶浓度。
5.接种细胞起始浓度太低或太高：调节最佳接种细胞浓度。
（二）传代后部分细胞漂浮
1.细胞状态不好：提高血清比例、稳定培养环境等方法进行改善。
2.吹打次数过多造成机械损伤：轻柔吹打，细胞呈单颗粒时可停止吹打，吹打过程避免气泡产生。
3.传代前细胞密度太大：一般细胞汇合度达到80%时可进行传代操作，传代密度需适中，传代密度过高也会导致传代后漂浮。
4.培养基更换后不适应：更换回原来的培养基；或者与原培养基比例混合后使用，使细胞有个适应期。
（三）传代后细胞成团
解决办法：1.接种时减少培养基的量以加快细胞贴壁，等细胞贴壁后再补加培养基到正常量。2.重新铺板，增加血清含量。3.采用低密度的接种方式，延长细胞换液的时间，避免细胞脱离。4.采用以高聚赖氨酸包被的器皿，以提高细胞贴壁紧密度，减少成团发生。
（四）培养细胞生长缓慢
1.培养液中某些细菌的必要元素如谷氨酰胺/成长因子被耗尽或缺乏或已遭损坏：换入新配置营养液，补加谷氨酰胺及成长因子；使用无抗生素培养液，若有污染，废弃培养液。新鲜血清需要储存于-10/-20℃。培养液需要2至8℃避光保护。
2.培养物中有少量细菌/真菌污染/支原体污染：换用新的保种细胞；分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。
（五）细胞生长周期变慢，边养边漂
1.传代操作不规范：通过观察细菌功能判断细胞消化的时间，通常在显微镜下看到细菌回缩成圆或有少许蛋白质脱落就停止消化状态，难消化状态的细菌则分为多次消化状态，一次停留时间不大于5min；频繁换液和冲洗细菌也会造成细胞状态不良，一般换液时间间隔为2~3天。
2.细胞传代时密度太稀或太密：建议细胞密度达80%左右进行传代，传代密度适中，密度过低会延长生长周期。

二、哺乳动物细胞培养的注意事项

（一）复苏细胞要快速解冻

（二）培养基的选择依细胞种类而定，常用的细胞培养基如下所示：

1.BME细胞培养基：BSS＋12种氨基酸＋谷氨酰胺＋8种维生素，而在此基础上改进的细胞培养基种类主要有DMEM、MEM、IMDM等。

2.MEM细胞培养基：在BME培养基的基础上删掉了赖氨酸、生物素，氨基酸含量丰富，有利于各种细菌单层繁殖，并能高温杀菌。

3.DMEM培养基：氨基酸浓度是MEM的二倍，而维生素浓度也是MEM的四倍，并且引入了双倍的HCO₃^-和CO₂浓度，从而获得了更有效的缓冲作用。

4.IMDM培养基：该培养液中还含有了硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES。用KNO3取代了Fe(NO3)3。

5.RPMI-1640细胞培养基：含有BSS＋21种氨基酸＋维生素11种等。现常被用于悬浮细胞培养和杂交瘤细胞的培育工作。

6.HamF10细胞培养基：既适宜于仓鼠、人二倍体细胞，也特别适宜于羊水细胞培养。

7.DMEM/F12细胞培养基：F12还可和DMEM等体积复合使用，从而获得了高浓度和细胞成分多样性相结合的新产品，目前这个培养基已广泛应用于许多原代的和较难养的细胞系的培育。

8.M199细胞培养基：除BSS以外，还富含五十三种成分，属全面培养基，主要进行鸡胚的成纤维细胞培养。

（三）血清的保存和使用：

血清应保存在-5℃至-20℃，若存放4℃不可超过一个月。解冻血清时，应先将血清置于2-8℃冰箱，并多次摇匀使它溶解，然后至室温放置使之升温，不能直接置于37℃水浴锅或温箱中。如若放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也增加，血清在解冻和热灭活后，按用量分装，-20℃保存，使用时避免反复冻融。

（四）细胞传代：

贴壁细胞的生长发育，必须经过严密观察以使细胞生长稳定。根据细胞类型，许多贴壁细胞会在当其密度达到70-90%密度时需要传代。而当转移贴壁细胞时，就一定要切去细胞上与和塑料结合的蛋白。控制胰酶消化的时间很重要。

哺乳动物细胞培养技术是生物技术领域中不可或缺的技术之一，应用广泛。卡梅德哺乳动物细胞表达系统以HEK293细胞和CHO细胞为表达宿主，可提供灵活的服务以满足客户的定制需求。

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