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卡梅德生物科技（天津）有限公司
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卡梅德生物科技（天津）有限公司
入驻年限：6 年
- 联系人：
卡梅德-小智
- 所在地区：
天津 武清区
- 业务范围：
抗体、技术服务、体外诊断、原辅料包材、细胞库 / 细胞培养、ELISA 试剂盒
- 经营模式：
生产厂商
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咨询公司新闻/正文
蛋白纯化技术
234 人阅读发布时间：2023-07-27 17:49
一.蛋白质纯化技术
蛋白质的纯化主要内容是指利用要分离的多种蛋白质组分之间蛋白的性质差异，首先依据蛋白的质量相似性可以进一步去除其他非蛋白型物质，再分别根据蛋白质之间的差异性可以将目的蛋白分离提取出来。
标签分离纯化相对应用于其他蛋白质纯化检测方法来说，技术比较成熟，操作比较容易，纯化标签需要根据实际情况选择，下表是部分常用标签：
卡梅德针对蛋白纯化，提供丰富的标签选择，包括His、GST、 FLAG、SUMO等。可提供一系列树脂和磁柱等纯化产品，用于从大肠杆菌、哺乳 动物、酵母、昆虫表达系统中纯化重组蛋白。
Ni2+可以与带有His6标签的融合蛋白结合，也可与咪唑进行结合。当标签蛋白杂质与层析柱表面结构中含有的蛋白杂质和Ni2+发生结合排斥效应时，向它们其中的依次地加入至少两个完全不同比例的相同浓度的咪唑溶液则可以通过自动过滤将所有这些标签蛋白杂质或与其它杂合蛋白的杂质分别准确地加以洗脱后固定沉积下来，从而才能够分离得到相对比较更高纯度的目标蛋白。
3.2 AKTA系统凝胶过滤层析实验步骤
（1）溶液和样品的准备（2）开机及清洗（3）预平衡（4）装柱（5）平衡（6）上样（7）收集蛋白（8）清洗及卸下层析柱（9）将出峰图以及原始数据保存后，先关程序再关系统最后关机。
五．蛋白纯化技术的应用
1.应用于分离、提纯以及浓缩化学物质；2.提纯、回收利用生产回收废水中的有用物质；3.浓缩、提纯海洋生物提取物；4.浓缩、提纯氨基酸/蛋白质；5.超细粉生产过程中的产品回收。
卡梅德多年来致力于重组蛋白的表达与纯化相关研究，可根据客户的不同需求提出多元化的蛋白纯化方案。根据蛋白质性质设计亲和纯化、离子交换、分子筛等，提供定制的蛋白纯化服务。
蛋白质的纯化主要内容是指利用要分离的多种蛋白质组分之间蛋白的性质差异，首先依据蛋白的质量相似性可以进一步去除其他非蛋白型物质，再分别根据蛋白质之间的差异性可以将目的蛋白分离提取出来。
二.蛋白纯化方法
1.标签纯化法：
标签分离纯化相对应用于其他蛋白质纯化检测方法来说，技术比较成熟，操作比较容易，纯化标签需要根据实际情况选择，下表是部分常用标签：
| 纯化标签 | 纯化原理 | 洗脱方法 |
| His-Tag | 在中性和弱碱性条件下可以和固定化的金属离子相互作用(如Ni离子，Zn离子，Co离子等) | 降低pH或咪唑 |
| GST | GST(谷胱甘肽S-转移酶)能特异地与其底物谷胱甘肽结合 | 还原谷胱甘肽 |
| FLAG | FLAG标签与抗FLAG抗体之间的特异性结合 | 低pH或EDTA |
| Strep II | 生物素(biotin)和链霉亲和素(streptavidin)之间的相互作用 | 兼容多种缓冲条件：高盐，洗涤剂，金属离子，螯合剂，还原剂 |
| Protein A | Protein A可以和IgG进行特异性结合 | 低pH |
| MBP | MBP可以与含有葡聚糖配基的填料特异性结合,达到快速、高效的捕获与纯化目的 | 麦芽糖 |
| Halo | 利用Halo-Tag酶基于化学共价的方式将融合蛋白质与特定化学物质之间实现共价结合 |
2.根据蛋白质分子大小差别的分离
（1）蛋白质膜超滤技术截留蛋白与透析（2）凝胶过滤法
3.根据蛋白质带电性质进行分离
（1）电泳法（2）离子交换层析法
三.常用的蛋白纯化实验流程
3.1 Ni2+亲和层析纯化His-Tag
Ni2+可以与带有His6标签的融合蛋白结合，也可与咪唑进行结合。当标签蛋白杂质与层析柱表面结构中含有的蛋白杂质和Ni2+发生结合排斥效应时，向它们其中的依次地加入至少两个完全不同比例的相同浓度的咪唑溶液则可以通过自动过滤将所有这些标签蛋白杂质或与其它杂合蛋白的杂质分别准确地加以洗脱后固定沉积下来，从而才能够分离得到相对比较更高纯度的目标蛋白。
3.2 AKTA系统凝胶过滤层析实验步骤
（1）溶液和样品的准备（2）开机及清洗（3）预平衡（4）装柱（5）平衡（6）上样（7）收集蛋白（8）清洗及卸下层析柱（9）将出峰图以及原始数据保存后，先关程序再关系统最后关机。
四、柱层析技术在重组蛋白纯化中的应用
柱层析原理是通过将样品固定相装在层析柱内，样品柱中固定的相不同且组分与样品固定相间的吸附的能力不同，使用各种溶剂对被吸附柱上残留的各组分等进行选择性洗脱处理时便会自动发生分离吸附及解析吸附作用，与样品固定相的吸附结合能力相对较弱一些的各组分将先被吸附洗脱而出样品柱，而分离吸附的能力相对较强一点的组分等则在后相被分离洗脱出柱。以此最终达到样品分离与纯化结合的目的。
五．蛋白纯化技术的应用
1.应用于分离、提纯以及浓缩化学物质；2.提纯、回收利用生产回收废水中的有用物质；3.浓缩、提纯海洋生物提取物；4.浓缩、提纯氨基酸/蛋白质；5.超细粉生产过程中的产品回收。
卡梅德多年来致力于重组蛋白的表达与纯化相关研究，可根据客户的不同需求提出多元化的蛋白纯化方案。根据蛋白质性质设计亲和纯化、离子交换、分子筛等，提供定制的蛋白纯化服务。