羊驼单B细胞单抗制备服务-卡梅德生物

1.羊驼单B细胞技术原理

    羊驼产生两种类型的抗体：(i) 由重链和轻链二聚体组成的常规抗体，以及 (ii) 一类只具有重链不含轻链，被称为重链抗体（heavy Chain Antibody，hcAb）。如图1中D所示，羊驼重链抗体缺少轻链，由4个HC和2个VH组成，其中VH区域又被称为纳米抗体或单域抗体（single domain antibody，sdAb）。和传统抗体相比，羊驼抗体具有稳定性高、易于进行基因改造，免疫原性弱，特异性强，亲和力高，在真核或者原核系统中表达量高等众多优点。并因其与人抗体重链氨基酸序列高度相似，更易于进行人源化改造，在当前的抗体药研究领域中应用广泛。

图1 A，传统IgG；B,传统抗体Fab片段；C，传统抗体的单链Fv片段；D，重链抗体或驼类抗体；E，驼类抗体的VH区域或单域抗体（sdAb）（卡梅德生物科技（天津）有限公司 ）

   单B细胞单抗制备技术是近些年来新兴的一种抗体制备技术。卡梅德生物利用此技术，从羊驼外周血或免疫器官中提取淋巴细胞，通过分选技术鉴定和分离出特定的B细胞后将其进行单细胞培养，使用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和抗体特异性引物鉴定单B细胞分泌抗体的特异性，通过PCR技术扩增出特异性抗体基因，将其克隆到表达载体中，并在指定的系统中进行表达，纯化好的抗体通过ELISA等方法进行表达验证。卡梅德生物利用单B细胞单抗制备技术获得的抗体品质出众，且成功率高。

1. 羊驼单B细胞技术抗体制备流程

①抗原制备。半抗原改造或完全抗原制备。
②动物免疫。抗原乳化，免疫羊驼4-5次；ELISA效价测定；抗血清采集。
③B细胞富集和筛选。PBMC分离；FACS Assay、ELISA Assay。④B细胞抗体测序。挑选检测的至少20个阳性细胞克隆进行RT-PCR，来扩增其抗体可变区基因，然后进行高通量测序。
⑤载体构建、抗体表达纯化。抗体小规模转染或放大。

1. 单B细胞单抗制备优势

类目	单B细胞技术	杂交瘤技术	噬菌体展示技术
抗体	天然	天然	非天然
抗体亲和力	高	高	中等
可成药性	高	高	低
时间	16～20周，可选快速免疫	20～26周，可选快速免疫	16～20周，可选快速免疫
抗体基因序列	直接获得	需要进一步测序	直接获得
抗体多样性	高	中等	中等
所能筛选的种属	不限种属	鼠、兔	不限种属

   单B细胞技术能够根据B细胞的特性快速制备单克隆抗体，直接获取完整的单一来源抗体，该方法不限种属、效率高、特异性高、抗体亲和力高、可成药性高、基因多样性好且具有全天然源性，并且能够直接获得抗体基因序列。

1. 羊驼单B细胞应用

羊驼单B细胞单抗通常广泛应用于以下4个方面：
①药物研发。抗体能够被用于新药物的研发，尤其是在癌症治疗领域具有极大的应用前景。
②疫苗研制。羊驼单B细胞单抗能够被用于提高疫苗的效力和特异性。
③免疫疗法。羊驼单B细胞单抗可以用于免疫治疗，能够为消费者提供更加个性化的治疗。
④基础医学研究。抗体具有特异性和多样性，能够用于解析生物学过程和疾病机制。
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